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GB/T 42239.2-2022 洗滌用酶制劑 第2部分: 脂肪酶

范圍
本文件規(guī)定了洗滌用脂肪酶的產(chǎn)品分類、要求、試驗方法、檢驗規(guī)則，以及標(biāo)志、包裝、運輸、貯存和保質(zhì)期。
本文件適用于經(jīng)微生物發(fā)酵、提純等工藝制得的用于洗滌劑工業(yè)的脂肪酶。

術(shù)語和定義
下列術(shù)語和定義適用于本文件。
脂肪酶  lipase
可將甘油三酯(油脂)水解，在不同階段可釋放出脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯及甘油，同時也能催化酯合成和酯交換反應(yīng)的酶。
脂肪酶酶活力  lipase activity
脂肪酶催化脂肪水解的能力。
注: 脂肪酶酶活力以脂肪酶酶活力單位表示，1g固體酶粉(或1mL液體酶)，在一定溫度和pH條件下，1min內(nèi)水解底物產(chǎn)生1μmol的可滴定脂肪酸，即為1個酶活力單位，用U/g表示。

符號和縮略語
下列符號和縮略語適用于本文件。
JB-04: 胡蘿卜素豬油污布。
F₁: 洗前白度值。
F₂: 洗后白度值。
R: 去污值。
P: 去污比值。

產(chǎn)品分類
按產(chǎn)品形態(tài)分為液體劑型和固體劑型。

要求
外觀和理化性能要求
產(chǎn)品的外觀和理化性能指標(biāo)應(yīng)符合表1的規(guī)定。


定量包裝要求
每批產(chǎn)品的銷售包裝凈含量應(yīng)符合 JJF 1070 的要求。

試驗方法
酶活力
按附錄A進(jìn)行。
采用不同于附錄A的方法測定時，應(yīng)提供所應(yīng)用的酶活力單位與本文件確定的酶活力單位的轉(zhuǎn)換系數(shù)。

附錄A  (規(guī)范性)
酶活力的測定
A.1 方法概要
脂肪酶在一定條件下，能使甘油三酯水解成脂肪酸、甘油二酯、甘油單酯和甘油，所釋放的脂肪酸可用標(biāo)準(zhǔn)堿溶液進(jìn)行中和滴定，用酚酞指示劑或自動滴定儀指示反應(yīng)終點，根據(jù)消耗的堿量，計算其酶活力。反應(yīng)式為:
RCOOH+NaOH→RCOONa+H₂O
注1: 洗滌劑的存在會嚴(yán)重影響本方法。依不同洗滌劑的類型和濃度不同，這種影響表現(xiàn)為從完全抑制到激活。
注2: 酶會附著在塑料上，因此實驗中用玻璃器具，避免使用塑料材質(zhì)器具(移液槍頭除外)。

A.2 試劑
A.2.1 聚乙烯醇(PVA)，聚合度1750±50[不同來源或批號的PVA對實驗結(jié)果有影響，結(jié)果報告應(yīng)標(biāo)明聚乙烯醇(PVA)廠家及生產(chǎn)批號]。
A.2.2 橄欖油(不同來源或批號的橄欖油對實驗結(jié)果有影響，結(jié)果報告應(yīng)標(biāo)明橄欖油廠家及生產(chǎn)批號)。
A.2.3 95%乙醇。
A.2.4 磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)。
A.2.5 十二水磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)。
A.2.6 氫氧化鈉。
A.2.7 鹽酸。
A.2.8 酚酞。

A.3 儀器
A.3.1 恒溫水浴: 精度為±0.2°C。
A.3.2 高速勻漿機。
A.3.3 pH計: 精度為0.01pH單位。
A.3.4 自動電位滴定儀。

【實驗儀器制備，推薦使用】酶活力的測定

京都電子KEM 電位滴定法自動電位滴定儀 AT-710S

自動電位滴定儀操作視頻：

A.3.5 自動移液器。
A.3.6 電磁加熱攪拌器。
A.3.7 電磁攪拌器。
A.3.8 微量滴定管: 10mL，分刻度≤0.05mL。
A.3.9 分析天平: 精度為0.0001g。

A.4 溶液
A.4.1 2%PVA溶液
稱取聚乙烯醇(PVA)10g(精確至0.1g)到500mL燒杯中，加水400mL，放入合適的轉(zhuǎn)子，在電磁加熱攪拌器上邊加熱邊攪拌，攪拌速度以能把所有的PVA攪拌起來為宜，在微沸狀態(tài)下加熱攪拌約1h，

直至全部溶解，在攪拌狀態(tài)下逐漸冷卻至室溫，定容到500mL，該溶液室溫下有效期為2d，密封保存。
注: 不能使用如冰塊等快速冷卻方式。
A.4.2 橄欖油底物溶液
稱取2%PVA溶液150g，加橄欖油50g，用高速勻漿機在7000r/min(當(dāng)乳化效果不好時可加大轉(zhuǎn)速)下處理3min，即成乳白色PVA乳化液，放入轉(zhuǎn)子，在電磁攪拌器上攪拌約20min，密封保存，該溶液室溫下有效期為2d。若底物溶液在保存期內(nèi)出現(xiàn)底部分層現(xiàn)象，應(yīng)重新配制，若重新配制依然有底部分層現(xiàn)象或者在水浴中反應(yīng)時有明顯沉淀產(chǎn)生，更換其他來源的聚乙烯醇(PVA)。
注: 每次使用前需要攪拌并在攪拌的狀態(tài)下移取該溶液，每次使用完畢及時密封保存。
A.4.3 鹽酸溶液(1mol/L)
A.4.4 氫氧化鈉溶液(0.5mol/L)
A.4.5 磷酸緩沖液(pH為7.5)
稱取磷酸二氫鉀(KH₂PO₄)19.6g，十二水磷酸氫二鈉(Na₂HPO₄·12H₂O)396.2g，加水約4.5L，攪拌至溶解均勻，用0.5mol/L氫氧化鈉溶液或1mol/L鹽酸溶液調(diào)整pH至7.50±0.05，定容到5L。
A.4.6 氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液(0.05mol/L)
按 QB/T 2739 配制與標(biāo)定0.5mol/L的氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液。使用時，準(zhǔn)確稀釋10倍。
A.4.7 酚酞指示液(10g/L)

A.5 樣品溶液的制備
稱取約1g樣品(稱準(zhǔn)至0.001g)，用磷酸緩沖液溶解并稀釋。樣品稱量定容后放入轉(zhuǎn)子，在電磁攪拌器上攪拌15min。
稀釋時控制酶液濃度，推薦稀釋倍數(shù)參考表A.1，例如，當(dāng)樣品酶活力約為100000U/g時，稱量約1g樣品到100mL容量瓶中，再稀釋200倍。樣品與空白消耗堿量之差在1.4mL~1.6mL范圍內(nèi)，若最終滴定結(jié)果超出該范圍，重新稀釋直至該范圍內(nèi)。


A.6 試驗步驟
A.6.1 程序
按照表A.2所列程序分別進(jìn)行空白和樣品試驗，選擇自動電位滴定法或酚酞指示劑滴定法進(jìn)行滴定。


A.6.2 滴定
A.6.2.1 自動電位滴定法
對自動電位滴定儀進(jìn)行儀器校正，用0.05mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液即刻滴定，以突躍為滴定終點，最終溶液pH在30s內(nèi)保持不變，記錄消耗0.05mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。
A.6.2.2 酚酞指示劑滴定法
加酚酞指示劑兩滴，用0.05mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液即刻滴定，滴定至微紅色并保持在30s內(nèi)不退色為滴定終點，記錄消耗0.05mol/L的NaOH標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積。

A.7 結(jié)果計算
產(chǎn)品的酶活力X以U/g表示，按公式(A.1)計算:

式中:
X ——產(chǎn)品的酶活力，單位為酶活力單位(U/g)；
V₁ ——滴定樣品時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升(mL)；
V₂ ——滴定空白時消耗0.05mol/L氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升(mL)；
c ——氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
0.05——氫氧化鈉標(biāo)準(zhǔn)溶液濃度換算系數(shù)；
n ——試樣的稀釋倍數(shù)；
50——0.05mol/L氫氧化鈉溶液1.00mL相當(dāng)于脂肪酸50μmol
m ——試樣的質(zhì)量，單位為克(g)；
1/15——反應(yīng)時間15min，以1min計。
結(jié)果按修約值表示，當(dāng)結(jié)果大于或等于10⁵，后三位取整；當(dāng)結(jié)果大于或等于10⁴且小于10⁵，后兩位取整；當(dāng)結(jié)果大于或等于10³且小于10⁴，后一位取整。

A.8 精密度
在重復(fù)性條件下獲得的兩次獨立測定結(jié)果的絕對差值不大于這兩個測定值的算術(shù)平均值的10%，以大于10%的情況不超過5%為前提。