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GB/T 29661-2013 化妝品中尿素含量的測(cè)定 酶催化法

●范圍
本標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定了化妝品中尿素含量的測(cè)定方法——酶催化法。
本標(biāo)準(zhǔn)適用于化妝品中尿素的定量測(cè)定，其定量下限為0.025%。

●原理
樣品在偏酸性條件下，所含尿素被尿素酶分解為銨鹽，用酸滴定，由此計(jì)算尿素含量。

●試劑和材料
除另 有規(guī)定外，試劑均為分析純。水為 GB/T 6682 規(guī)定的三級(jí)水。
尿素酶: 0.5g以下可將0.25 g尿素于40°C~45°C在1h內(nèi)完全分解。按照產(chǎn)品說(shuō)明保存。
0.1mol/L鹽酸: 配制方法按 GB/T 601。
0.1mol/L NaOH溶液: 稱取0.40g NaOH固體，溶于100mL水中。
無(wú)水乙醇。
塑料薄膜。

●儀器和設(shè)備
高型燒杯，100mL。
酸式滴定管。
超聲波清洗儀。
磁力攪拌器。
pH計(jì): 精度0.01。
分析天平: 感量0.01g。
恒溫水浴鍋。

●分析步驟
試樣制備
水劑類、乳液類、膏霜類(O/W)樣品
稱取均勻樣品0.5g(精確至0.01g)于高型燒杯中，加入50mL水，用塑料薄膜封口，超聲提取20min。
將高型燒杯放在磁力攪拌器上，邊攪拌邊滴加鹽酸中和至pH4.0(用pH計(jì), 不計(jì)量, 若溶液呈pH<4.0，則需滴加NaOH溶液到pH>4.0，再用鹽酸中和至pH4.0，加入0.2g粉碎較細(xì)的尿素酶立即用塑料薄膜封口，置于 50°C水浴中不時(shí)的搖晃，30min后取出冷卻至室溫，邊攪拌邊用0.1mol/L的鹽酸滴定至pH4.0，記錄消耗的0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V₁。同時(shí)做一空白試驗(yàn)，記錄消耗的0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積V₀。
膏霜類(W/O)、油溶性樣品
稱取均勻樣品0.5g(精確至0.01g)于15mL離心管中，加10mL無(wú)水乙 醇，超聲提取20min。以不低于5000r/min離心15min，將上清液全部轉(zhuǎn)移至高型燒杯中，再加入40mL水，搖勻。
余下步驟與"水劑類、乳液類、膏霜類(O/W)樣品"相同。
唇膏類樣品
稱取均勻樣品0.5g(精確至0.01g)于15mL離心管中，加10mL無(wú)水乙醇，在80°C水浴中加熱3min~5min使唇膏融化，渦旋1min，超聲提取20min。以不低于5000r/min離心15min，將上清液全部轉(zhuǎn)移至高型燒杯中，再加入40mL水，搖勻。
余下步驟與"水劑類、乳液類、膏霜類(O/W)樣品"相同。
平行試驗(yàn)
按上述步驟，對(duì)同一樣品進(jìn)行平行實(shí)驗(yàn)測(cè)定。

●結(jié)果計(jì)算
按式(1)計(jì)尿素含量，以%表示:

式中:
60.06 ——尿素的相對(duì)分子質(zhì)量；
V₁ ——樣品消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升(mL)；
V₀ ——空白試驗(yàn)消耗0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的體積，單位為毫升(mL)；
c   ——0.1mol/L鹽酸標(biāo)準(zhǔn)溶液的濃度，單位為摩爾每升(mol/L)；
m  ——試驗(yàn)樣品質(zhì)量，單位為克(g)。
計(jì)算結(jié)果保留至小數(shù)點(diǎn)后1位。
注: 若檢測(cè)尿素含量超過(guò)20%，需要以減少樣品稱樣量的方式重新進(jìn)行測(cè)定。

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